随着单细胞组学研究的飞速发展，组织提核技术逐渐成为单细胞研究中的必要手段。单核测序相较单细胞测序有着诸多优势：简单快捷的实验步骤，更少细胞解离引起的类型偏好，解除细胞大小对微流控捕获效率的偏好，减少解离时应激基因诱导的转录假象，使细胞直径过大、细胞形状不规则、冻存组织做单细胞研究成为可能。目前神经细胞[1-3]、心脏[4]、肾脏[5-6]、肝脏[7-8]、脂肪[9-10]等的单细胞研究均可选用细胞核进行实验。
然而提核技术也存在一定问题，比如提核后的细胞核状态不好、细胞核的得率较低、细胞核易粘连、碎片和杂质过多且难以去除等。
为提高科研服务水平，优化提核技术，助力单细胞研究，公海710研究人员经过不断钻研，攻克技术难关，成功研发出【动物组织细胞核分离试剂盒】。目前此款试剂盒已成功测试新鲜组织、冻存组织的多种组织类型，包括小鼠脑、人脑、小鼠心脏、小鼠肾脏、小鼠肝脏、人脑、人卵巢、人肺、猪心脏、肝脏、脂肪等等，数据结果表现优秀。
图1 公海710自研组织细胞核分离试剂盒
检验原理
该试剂盒通过利用表面活性剂破坏组织细胞的膜和蛋白质结构，释放细胞核，使之处于游离状态，然后通过密度梯度离心纯化细胞核。得到的纯净细胞核可适用于单细胞核转录组、单细胞 ATAC-seq 和单细胞多组学等实验。
主要组成成分
表1：公海710自研组织细胞核分离试剂盒主要组成成分表
部分测试数据展示
图2 人卵巢 OCT 包埋组织（左上）、猪心脏（右上）、人脑（左下）、小鼠肾脏（右下）提核结果
图3 小鼠脑提核数据展示（细胞活率0.12%、结团率5.86%）
图4 小鼠脑提核样本的3’单细胞转录组小测结果（细胞数7746，基因中位数1582）
经过以上数据展示，可以发现公海710自主研发的核分离试剂盒在各类新鲜组织、冻存组织提核的实验中表现很好。尤其是从小鼠脑单细胞核转录组的实际小测数据和分析结果来看，在测序饱和度不高的前提下，捕获细胞数、基因中位数、Fraction Reads in Cell 等重要指标非常良好。此外细胞分群效果良好，星形胶质细胞、少突胶质细胞、小神经胶质细胞、兴奋性神经元、抑制性神经元等关键细胞类型均得到了很好的鉴定，各细胞类型的数量和比例符合理论值。
经过上述介绍，相信您对这款试剂盒已经有了一些了解，公海710始终以更高标准的服务、追求卓越的态度提供科研服务，希望公海710自研【动物组织细胞核分离试剂盒】可以助您更好的开展单细胞组学实验，为您提供更加准确的单细胞组学方案。
参考文献：
[1] Del-Aguila JL, Li Z, Dube U, Mihindukulasuriya KA, Budde JP, Fernandez MV, Ibanez L, Bradley J, Wang F, Bergmann K, Davenport R, Morris JC, Holtzman DM, Perrin RJ, Benitez BA, Dougherty J, Cruchaga C, Harari O. A single-nuclei RNA sequencing study of mendelian and sporadic AD in the human brain. Alzheimers Res Ther. 2019 Aug 9; 11(1): 71.
[2] Srinivasan K, Friedman BA, Etxeberria A, Huntley MA, van der Brug MP, Foreman O, Paw JS, Modrusan Z, Beach TG, Serrano GE, Hansen DV. Alzheimer's patient microglia exhibit enhanced aging and unique transcriptional activation. Cell Rep. 2020 Jun 30; 31(13): 107843.
[3] M?rtin A, Calvigioni D, Tzortzi O, Fuzik J, W?rnberg E, Meletis K. A spatiomolecular map of the striatum. Cell Rep. 2019 Dec 24; 29(13): 4320-4333. e5.
[4] Vidal R, Wagner JUG, Braeuning C, Fischer C, Patrick R, Tombor L, Muhly-Reinholz M, John D, Kliem M, Conrad T, Guimar?es-Camboa N, Harvey R, Dimmeler S, Sauer S. Transcriptional heterogeneity of fibroblasts is a hallmark of the aging heart. JCI Insight. 2019 Nov 14; 4(22): e131092.
[5] Lake BB, Chen S, Hoshi M, Plongthongkum N, Salamon D, Knoten A, Vijayan A, Venkatesh R, Kim EH, Gao D, Gaut J, Zhang K, Jain S. A single-nucleus RNA-sequencing pipeline to decipher the molecular anatomy and pathophysiology of human kidneys. Nat Commun. 2019 Jun 27; 10(1): 2832.
[6] O'Sullivan ED, Mylonas KJ, Hughes J, Ferenbach DA. Complementary roles for single-nucleus and single-cell RNA sequencing in kidney disease research. J Am Soc Nephrol. 2019 Apr; 30(4): 712-713.
[7] Nault R, Fader KA, Bhattacharya S, Zacharewski TR. Single-nuclei RNA sequencing assessment of the hepatic effects of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin. Cell Mol Gastroenterol Hepatol. 2021; 11(1): 147-159.
[8] Rodrigues PM, Banales JM. Characterizing the heterogeneity of liver cell populations under a nASH-related hepatotoxicant using single-nuclei RNA sequencing. Cell Mol Gastroenterol Hepatol. 2021; 11(1): 294-296.
[9] Sárvári AK, Van Hauwaert EL, Markussen LK, Gammelmark E, Marcher AB, Ebbesen MF, Nielsen R, Brewer JR, Madsen JGS, Mandrup S. Plasticity of epididymal adipose tissue in response to diet-induced obesity at single-nucleus resolution. Cell Metab. 2021 Feb 2; 33(2): 437-453.e5.
[10] Sun W, Dong H, Balaz M, Slyper M, Drokhlyansky E, Colleluori G, Giordano A, Kovanicova Z, Stefanicka P, Balazova L, Ding L, Husted AS, Rudofsky G, Ukropec J, Cinti S, Schwartz TW, Regev A, Wolfrum C. snRNA-seq reveals a subpopulation of adipocytes that regulates thermogenesis. Nature. 2020 Nov; 587(7832): 98-102.
